F81细胞培养、病毒接种及传代方法

1. 细胞培养:

将F81细胞培养于含有5%胎牛血清(FBS)的DMEM培养基中，置于37℃、5% CO2培养箱中培养3~4天，直至细胞生长至单层。

2. 病毒接种:

2.1 使用含有EDTA的胰蛋白酶消化细胞，制备细胞悬液。

2.2 将细胞悬液接种于6孔细胞培养板中，待细胞长成单层。

2.3 将过滤后的鼻拭子样本接种于长满F81单层细胞的6孔板中，每孔接种200 µL。

2.4 设置正常细胞对照组。

2.5 将细胞培养板置于37℃、5% CO2培养箱中孵育1~2小时。

2.6 补加细胞培养基至每孔2 mL，继续在37℃、5% CO2培养箱中培养，并每天观察细胞状态。

3. 病毒收集:

3.1 若出现细胞病变(CPE)，且病变程度达到80%以上，则进行病毒收集。

3.2 将细胞培养物置于-80℃反复冻融两次。

3.3 将冻融后的细胞培养物以4000 rpm离心5分钟，收集上清液。

3.4 将上清液转移至离心管中，置于-80℃保存以备后续鉴定。

4. 细胞传代:

4.1 若接种细胞4天后仍未出现病变，则进行细胞传代。

4.2 将细胞培养板置于-80℃反复冻融两次。

4.3 将冻融后的细胞培养物以4000 rpm离心5分钟，收集上清液。

4.4 将上清液转移至离心管中，置于-80℃保存，用于后续传代培养。