高通量单细胞全长转录本测序方法及载体

本发明提供了一种高通量单细胞全长转录本测序方法，该方法使用带有细胞标签和分子标签的载体，通过捕获单个细胞的mRNA，将mRNA逆转录成cDNA，并使用转座酶将cDNA切割成短片段，最后通过标签信息还原成原始长片段cDNA，实现高通量单细胞全长转录本测序。

该方法的具体实施路线分为四个部分：

1. 制备大量带有多拷贝特定标签序列（细胞标签和分子标签）的载体；
2. 将单细胞分离至微孔内，并使用一个带有细胞标签的载体捕获该单细胞内的信使RNA；
3. 将逆转录后形成的cDNA与转座酶复合体进行结合；
4. 分子标签载体杂交捕获带有转座复合体的全长cDNA，并将分子标签转移至cDNA上。

细胞载体由固相载体和DNA分子组成。其中，DNA分子分为单链DNA分子C和单链DNA分子D两部分，形成部分双链结构。单链DNA分子C具有细胞标签和mRNA捕获区，而单链DNA分子D与单链DNA分子C的中部区段反向互补形成双链结构。固相载体为颗粒状固相，可以是磁珠、胶珠或二氧化硅珠等。DNA分子通过连接到颗粒状固相的表面实现载体的构建。单个固相载体表面可以连接多条DNA分子，序列相同的DNA分子构成一种DNA分子类型。

本发明通过使用带有细胞标签和分子标签的载体，实现了对单个细胞全长转录本的高通量测序，该方法具有以下优点：

1. 高通量：可以同时对大量的细胞进行测序；
2. 全长：可以测序到完整的转录本；
3. 高精度：可以准确地识别每个转录本的来源细胞。

本发明在单细胞测序领域具有重要的应用价值，可以用于研究细胞异质性、发育过程、疾病发生机制等。