Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid (Y2H) 系统用于验证 SsCP1 相互作用蛋白

使用 Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid (Y2H) 系统 (Clontech, Palo Alto, CA, USA) 验证 SsCP1 与其他蛋白质的相互作用。SsCP1 (不含信号肽, SP) 被引入 pGBKT7 作为诱饵, 而 AtPR1 (不含 SP) 被引入 pGADT7 作为猎物。诱饵和猎物质粒被共转化到酵母菌株 Y2H Gold 中, 按照制造商的说明进行操作。通过 PCR 扩增, 作者构建了具有不同 N 端区域缺失的 Sscp1 突变体, 并将其亚克隆到 pGBKT7 中。转化后的酵母细胞在含有 X-半乳糖苷酶 (X-gal) 和黄曲霉素 A 的合成缺失 (SD)/-Trp-Leu 培养基和 SD/-Trp-Leu-HisAde 培养基上进行生长测试。