子宫内膜组织的采集和脱细胞化方案的优化。

牛(波斯塔鲁斯种,安格斯品种,年龄12-18个月)被放养在一个有围栏的开放草地上,可以自由进食澳大利亚本土草和苜蓿干草。该牧场的密度通常是每10英亩放养一只动物。从屠宰场收集到的正常的母性生殖道组织(每组12个,每组4个)立即用冰冷的Dulbecco改良鹰氏培养基(Sigma,美国)运送到实验室。到达后,组织用含有1%青霉素/链霉素和两性霉素的磷酸盐缓冲液简要清洗,以去除多余的血液并减少初始微生物负荷。子宫被小心地取出,其余的组织(阔韧带、输卵管和卵巢)被丢弃。然后,内膜从肌层中手术分离出来。然后将内膜切成2厘米的块,并放置在Milli-Q水中(含有1%青霉素/链霉素和两性霉素),在室温下磁力搅拌器上不断搅拌过夜。新鲜的Milli-Q水每3到4小时更换一次。每批脱细胞化的子宫内膜组织包含来自四个不同动物的代表性样本。在用Milli-Q水洗涤24小时后,每批内膜组织(n = 4混合)用相应的去细胞化试剂处理:方案1(P1)-4% SDS(Sigma),方案2(P2)-1% SDS,方案3(P3)-4% SDC溶液(Sigma)。每个方案都在常温下(搅拌板)下进行,新鲜溶液每3到4小时更换一次,直到所有组织块变得透明(通常需要4到5天)。经过去细胞化处理后,组织在过夜的水中进行了彻底冲洗,然后在室温下用1M NaCl中的2,000 kU DNase(Sigma)处理3小时。然后,脱细胞化的组织在Milli-Q水中再洗涤2天,多次更换水,以消除任何SDS / SDC的细胞毒性残留物,然后进行冷冻干燥和研磨成粉末。

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