利用SDS-PAGE如何判断目的蛋白有没有表达
SDS-PAGE可以用于检测目的蛋白是否表达。以下是步骤:
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收集细胞:收集目的蛋白表达的细胞(例如大肠杆菌)。
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蛋白提取:使用蛋白提取缓冲液提取蛋白质。
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SDS-PAGE凝胶制备:制备SDS-PAGE凝胶。
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蛋白质定量:使用Bradford或Lowry方法定量蛋白质。
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加载样品:将提取的蛋白质样品加入SDS-PAGE凝胶中。
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电泳分离:进行电泳分离。
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染色:用染色剂染色。
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分析:通过比较分子量标准品和样品蛋白的分子量,可以确定目的蛋白是否表达。
如果目的蛋白表达,则应该在相应的位置上出现一个带状条纹。如果没有出现,则可能是因为没有表达或者表达量过低。
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