重组质粒连接的步骤
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选择适当的限制性内切酶将质粒和外源DNA剪切成互补的末端。
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将剪切好的质粒和外源DNA加入同一管中,加入连接酶(T4 DNA连接酶等)。
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在适当的温度和时间条件下,连接酶催化下的连接反应进行。连接酶能够将两段DNA末端连接起来,形成一个完整的DNA分子。
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转化连接后的质粒至细菌中进行扩增和筛选,获得所需的重组质粒。
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对所获得的重组质粒进行验证,例如进行DNA测序、限制性内切酶切割、PCR扩增等方法来确认连接是否成功。
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