反复冻融处理制备dECM：优化脱细胞化方案以增强生物功能

为了制备具有出色生物功能的dECM，最主要的困难在于设计一种强大而高效的细胞脱细胞化方案[23]。本研究中，我们使用了多种细胞脱细胞化方法，通过反复冻融循环（n = 0，3，7，分别称为Control，F/T 3和F/T 7）制备了dECM。从猪腹膜中获得的dECM支架经历了一系列脱细胞化步骤，包括反复冻融循环、碱和酸处理、有机溶剂处理、低渗和高渗溶液处理，以及后续的冻干和灭菌过程（图1A和B）。虽然-20°C和-80°C是常用的冻融处理温度，但它们需要更长时间才能彻底去除细胞组分[32]。在本研究中，猪腹膜在液氮中冷冻5分钟，然后在室温下解冻一个冻融循环。