WRKY21直接调控水稻PHT1;1基因表达的分子机制

为了鉴定能够调节PHT1;1基因表达的潜在转录因子（TF），研究人员首先生成了PHT1;1启动子的几个截短片段，并将它们与GUS报告基因融合，然后产生了转基因水稻植株。研究人员使用了启动子片段的一部分（F0：-1164 bp至-112 bp）作为诱饵进行了酵母单杂交（Y1H）筛选，结果发现了一个编码III型WRKY转录因子WRKY21的候选基因。酵母单杂交实验表明WRKY21与PHT1;1启动子直接结合并调节PHT1;1的表达。为了进一步研究WRKY21在PHT1;1启动子中的结合位点，研究人员使用了两个带有W-box的片段（F1和F2）进行了Y1H实验。结果显示WRKY21可以与F2结合，但不能与F1结合。此外，电泳迁移实验（EMSA）和染色质免疫共沉淀-qPCR分析（ChIP-qPCR）也显示WRKY21可以在体外和体内与F2的相应区域结合。综合上述结果表明，WRKY21与PHT1;1启动子中的W-box结合。