肝癌细胞系HepG2中ARAP1启动子活性及甲基化调控机制研究

根据专家一的建议，本论文对相关实验研究进行了补充。通过结合HCC组织和HepG2的多组学数据分析，我们筛选出了ARAP1作为研究的靶点，并进行了以下实验分析的补充：首先，我们通过公共的CAGE数据集和RT-qPCR实验验证了肝癌细胞系HepG2在ARAP1的两个选择性启动子处具有不同的启动子活性以及对应不同的转录表达丰度。其次，我们利用BSP技术检测了HepG2中ARAP1不同活性启动子的DNA甲基化状态。进一步，我们使用DNA甲基化靶向编辑技术（CRISPR-dCas9-Tet1CD）证实了ARAP1的特定启动子在HCC中受DNA甲基化状态调控的机制。最后，我们利用shRNA和慢病毒过表达系统调控ARAP1不同转录本的表达，并构建稳定转染的HepG2细胞系。通过细胞表型实验，我们发现ARAP1-S能够抑制细胞迁移和侵袭，而ARAP1-L则能促进细胞迁移和侵袭。这些相关实验结果已经添加至论文的3.7、3.8和3.9部分。