基因组限制性酶切扫描法（RLGS）：DNA甲基化图谱检测技术

基因组限制性酶切扫描法（restriction landmark genome scanning，RLGS）是首个提出的DNA甲基化图谱检测技术。该技术利用放射性标记的限制性内切酶位点在二维电泳系统中创建'地标'，并在最终放射自显影照片上显示出来。这项技术首次提出并使用的限制性内切酶NotI识别的酶切位点约89％包含在CpG岛内，因此也被称为landmarks[66]。该方法首先使用甲基化敏感的NotI（酶切序列GC↓GGCCGC）或AscI (GG↓CGCGCC)对样本DNA进行消化，以识别包含2个CG点的序列。这种序列在基因组中出现的频率并不高，但在CpG岛中却很常见。接下来，使用放射性物质（32P）对DNA片段末端进行标记，然后再次使用甲基化敏感的酶（如EcoRV、PstI或PvuII）对DNA进行酶切，以进一步片段化DNA。在凝胶电泳后，使用第三个甲基化不敏感的酶HinFI对凝胶中的DNA进行酶切，并在非变性聚丙烯酰胺凝胶中进行继续电泳。这次电泳的方向与第一次电泳方向垂直。最后，使用同位素磷扫描仪对样品进行扫描[67]。