柑橘类化合物提取、纯化和核磁共振表征方法

大约从60-100个渗透的植物中剪下约500克的叶子，将其切成约0.25平方厘米的小块。叶子立即进行快速冷冻并冷冻干燥至完全干燥。然后用研钵和杵将干燥的叶子研磨成粉末。然后将叶粉放入一个4升烧瓶中（每12.5毫升1克新鲜重量的叶子），加入一个磁力搅拌子，使用乙酸乙酯在室温下连续搅拌72小时进行提取。使用真空过滤对提取物进行过滤，然后使用旋转蒸发进行干燥。使用装有硅胶（SiliaFlash® P60）的直径为7厘米的柱进行快闪色谱。采用正己烷（Fisher Scientific，ACS和HPLC级）和乙酸乙酯作为流动溶剂。通过等温洗脱（60％正己烷，40％乙酸乙酯）收集500毫升的洗脱液。通过LC-MS分析洗脱液，将含有目标化合物的洗脱液混合并使用旋转蒸发干燥。然后将干燥样品重新悬浮在约1毫升的DMSO中。然后使用Isolera Prime Biotage和Sfår C18 Duo 12g柱进一步纯化样品。使用水（A）和乙腈（B）作为溶剂收集洗脱液。溶剂B的梯度如下：30％持续3倍柱体积（CV），30-80％持续25倍CV，80-100％持续2倍CV。通过LC-MS验证活性洗脱液，然后使用旋转蒸发或冷冻干燥将其完全干燥。对于柑橘类中间体，使用Varian Inova 600 MHz光谱仪在室温下获取了1H NMR和13C NMR光谱。偏移是相对于残余溶剂峰（CDCl3，Acros Organics）进行参考，并以ppm为单位以Me4Si作为0.0 ppm的内部参考标准报告。