重组质粒转化步骤详解:从制备感受态细胞到提取质粒
重组质粒转化的步骤包括:
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制备大肠杆菌的感受态细胞(如DH5α),通常使用含CaCl2的转化缓冲液进行处理。
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将重组质粒DNA和感受态细胞混合,使其在冰上孵育一段时间,使DNA与细胞膜结合。
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将混合物置于高温(如热冲击)或电击脉冲中,使细胞膜通透性增加,使DNA进入细胞。
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细胞在含有营养成分和抗生素的寒藏培养基中孵育,以筛选出含有重组质粒的细胞。
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对筛选出来的细胞进行分离、培养、放大,最终提取重组质粒。
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