SUI患者前壁阴道组织的收集和实验方法

材料和方法

伦理声明

本研究获得了郑州大学附属中心医院伦理委员会的批准和监督，并遵守‘赫尔辛基宣言’所发布的指导方针。在取得样本之前，所有参与者都签署了知情同意书。动物实验方案也获得了郑州大学附属中心医院动物保护和使用委员会以及美国国立卫生研究院提出的实验室动物护理和使用指南的批准。我们尽最大努力减少实验动物的数量和痛苦。

组织样本收集

首先，从在郑州大学附属中心医院接受手术的30名SUI患者（平均年龄为47.6±8.4岁）收集前壁阴道组织；同时，也从在同一时期接受其他手术的30名患者（平均年龄为46.6±9.9岁）收集前壁阴道组织作为对照组。两组患者均未并发结缔组织相关疾病，如子宫内膜异位症、妇科恶性肿瘤、慢性阻塞性肺气肿或类风湿性关节炎，并且在手术前3个月内未接受性激素治疗。前壁阴道组织标本从子宫颈处隔开约1-2厘米，每个样本分为两部分；其中一部分标本用10％中性缓冲福尔马林固定在25℃下12-24小时，然后石蜡包埋用于免疫荧光分析，另一部分则存放在-80℃下进行反转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和Western blot分析。此外，还从同样时期的3名对照组（平均年龄为47.3±7.6岁）中选择前壁阴道组织进行成纤维细胞分离，用磷酸盐缓冲盐水（PBS）冲洗、切成小块，然后用胶原酶脱离进行细胞培养和后续实验。