q-RTPCR 引物设计指南：长度、Tm 值、GC 含量及 3' 末端

根据序列设计 q-RTPCR 引物需要注意以下几点：

1. 引物长度通常在 18-24 个碱基之间，最好是 20 个碱基左右。
2. 引物的 Tm 值应该在 55-65℃ 之间，最好是 60℃ 左右。
3. 引物的 GC 含量应该在 40-60% 之间，最好是 50% 左右。
4. 引物的 3' 末端应该尽量避免出现重复的序列，避免引物间的非特异性杂交。

根据以上要求，设计 q-RTPCR 引物如下：

Forward primer: AGTTCGTAAAAAGGAGCCGG

Reverse primer: GTTGTAGTGACTCGTGTAGC

这两个引物的长度都是 20 个碱基，Tm 值分别为 60.1℃ 和 59.7℃，GC 含量分别为 50% 和 45%。同时，它们的 3' 末端都没有出现重复的序列，因此可以用于 q-RTPCR 实验。