石蜡切片法步骤详解及注意事项 - 组织学实验必备指南

石蜡切片法是一种常用的组织学制片技术，用于制作组织学切片以及进行免疫组化等实验。下面是石蜡切片法的详细步骤及注意事项：

步骤一：取材处理

1. 取得需要制作组织学切片的组织样本，如动物组织、人体组织等。
2. 将样本放入10%中性缓冲福尔马林中，固定时间根据组织的大小而定，通常为24小时。
3. 去除缓冲液，转入70%乙醇中，再转入80%乙醇中，以便组织逐渐脱水。
4. 将组织转入95%乙醇中，再转入100%乙醇中，以便组织完全脱水。

步骤二：浸透处理

1. 将脱水后的组织转入100%甲醇中，浸透时间通常为30分钟。
2. 将组织转入100%乙醇和甲醇混合的1:1溶液中，浸透时间为30分钟。
3. 将组织转入100%甲醇中，浸透时间为30分钟。
4. 将组织转入甲醇和石蜡混合的1:1溶液中，浸透时间为30分钟。
5. 将组织转入纯石蜡中，浸透时间为1小时。

步骤三：包埋处理

1. 将浸透后的组织置于包埋机中，加热至60℃，使石蜡充分渗透组织。
2. 将渗透后的组织置于包埋机中，加热至65℃，使石蜡充分包埋组织。
3. 将包埋后的组织置于冰箱中，冷却至-20℃。

步骤四：切片处理

1. 将冷却后的组织块从包埋模具中取出，放入切片机中。
2. 切片机切制出5-10微米的薄片。
3. 将切制好的薄片放入温水中，使其展开。
4. 将展开后的薄片放在玻片上，干燥至完全干燥。

注意事项：

1. 在取材处理的过程中，应尽量保持组织的完整性和清洁度。
2. 在浸透处理和包埋处理的过程中，应注意时间和温度的控制，以充分渗透和包埋组织。
3. 在切片处理的过程中，应注意切片机的调整和操作，以获得理想的切片厚度和形状。
4. 制作过程中应注意安全，避免使用有毒、易燃和易爆的溶剂和试剂。