GS115和KM71中HIS4和AOX1基因插入的线性化策略

GS115和KM71中HIS4和AOX1基因插入的线性化策略

本指南介绍了在酵母菌株GS115和KM71中进行HIS4和AOX1基因插入的DNA线性化步骤。

HIS4基因插入

• 菌株: GS115 和 KM71* 线性化酶: Sal I* 预期结果: * GS115: His+ Mut+ * KM71: His+ MutS

**步骤:**1. 使用Sal I限制性内切酶消化包含HIS4插入片段的质粒DNA。2. 通过凝胶电泳分离线性化的DNA片段。3. 从凝胶中纯化线性化的DNA片段。4. 将纯化的线性DNA转化到GS115或KM71感受态细胞中。

AOX1基因替换

• 菌株: GS115* 线性化酶: Bgl II* 预期结果: His+ MutS

**步骤:**1. 使用Bgl II限制性内切酶消化包含AOX1替换片段的质粒DNA。2. 通过凝胶电泳分离线性化的DNA片段。3. 从凝胶中纯化线性化的DNA片段。4. 将纯化的线性DNA转化到GS115感受态细胞中。

注意: 确保使用高质量的DNA和酶进行线性化反应，以获得最佳结果。建议参考所用酶和酵母菌株的相应指南，以获取详细的实验方案。