pPIC9K 酵母表达载体:用于分泌表达的强大工具
pPIC9K 酵母表达载体:用于分泌表达的强大工具
描述:
pPIC9K 是一款功能强大的酵母表达载体,适用于在毕赤酵母菌株 GS115 和 KM71 中进行高效的重组蛋白分泌表达。该载体包含以下特点:
- 卡那霉素抗性基因: 用于在体内筛选多拷贝插入。* α-因子分泌信号: 引导重组蛋白分泌到培养基中,简化后续的纯化步骤。* 9276 bp 融合质粒: 提供充足的克隆容量,可容纳较大基因的插入。* 四个独特的克隆限制性酶切位点: SnaB I、EcoR I、Avr II 和 Not I,方便与 α-因子分泌信号序列进行同框融合。* HIS4 选择标记: 用于在毕赤酵母中进行转化子的筛选。
使用方法:
- 将目的基因克隆到 pPIC9K 载体的 α-因子分泌信号序列下游,并保持阅读框一致。2. 将构建好的重组质粒转化到毕赤酵母菌株 GS115 或 KM71 中。3. 利用 HIS4 选择标记筛选阳性转化子。4. 诱导表达重组蛋白,并从培养基中纯化目标蛋白。
其他信息:
- 对于在 GS115 或 KM71 中插入到 AOX1 位点,需要将 pPIC9K 载体线性化。
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