Nampt在SUI成纤维细胞ECM代谢中的作用：一项研究

结果

本研究旨在探讨Nampt在SUI成纤维细胞中的ECM代谢中的作用。首先，分析了SUI患者和大鼠中Nampt表达模式。此外，我们还研究了Nampt在体外调节成纤维细胞ECM代谢的机制。研究结果表明，Nampt在SUI中过度表达，而Nampt沉默可以抑制SUI成纤维细胞的ECM降解。此外，我们还验证了Nampt沉默可以通过增强自噬抑制SUI成纤维细胞ECM降解。

Nampt在SUI患者中过度表达。衰老、阴道分娩和激素水平下降（更年期）被认为是SUI的主要风险因素[25-27]。同时，Nampt参与各种生理过程，如细胞分化、衰老和凋亡[28,29]。因此，为了阐明Nampt在SUI中的作用，我们收集了SUI患者和非SUI患者的前阴道壁组织，检查了组织中Nampt表达模式。RT-qPCR和Western blot分析结果表明，与非SUI患者相比，SUI患者组织中Nampt高度表达（p <0.01，图1a-b）。此外，免疫荧光结果表明，Nampt的荧光信号在SUI患者中相对于非SUI患者过度表达（p <0.01，图1c）。总体而言，这些发现表明Nampt在SUI患者中高度表达。

Nampt在SUI大鼠模型中过度表达。采用阴道扩张法（VD）建立了SUI大鼠模型，并通过ALPP和MBV检测进行了确认[18]。发现VD治疗显著降低了大鼠的ALPP和MBV（p <0.01，图2a-b），这表明SUI大鼠模型构建成功。进一步通过RT-qPCR和Western blot分析检查了获得的大鼠前阴道壁组织中的Nampt表达模式，结果表明VD治疗导致组织中Nampt的上调（p <0.01，图2c-d），免疫荧光结果表明VD治疗导致小鼠组织中Nampt荧光信号增强（p <0.01，图2e）。总之，这些发现表明Nampt在SUI大鼠模型中高度表达。

Nampt在IL-1β处理的前阴道壁成纤维细胞中上调表达。成纤维细胞功能障碍被确认为SUI发病和发展的主要原因[21,30]。因此，我们从非SUI患者中分离和培养成纤维细胞。免疫细胞化学分析表明，细胞对于成纤维标志物vimentin呈阳性反应，而对于肌上皮细胞标志物keratin呈阴性反应（图3a）。此外，现有文献表明，Nampt参与IL-1β诱导的基质降解过程[31,32]。因此，我们用不同浓度的IL-1β处理成纤维细胞，发现IL-1β浓度越高，细胞活性下降越明显（p <0.05，图3b）。此外，IL-1β处理导致细胞中Nampt水平浓度依赖性上调（p <0.05，图3c-d）。总之，这些发现表明IL-1β处理上调了成纤维细胞中Nampt的表达，并与浓度相关。此外，选择10 ng / mL的IL-1β剂量进行后续实验。

Nampt沉默抑制IL-1β诱导的SUI成纤维细胞ECM降解。越来越多的研究证实，机械损伤引起的ECM重塑可能涉及SUI的发病机制[4,33]，而ECM代谢已知是由成纤维细胞介导的[34]。为了进一步阐明Nampt在ECM降解中的作用，将3个LV包装的Nampt shRNA感染到10 ng / mL IL-1β处理过的成纤维细胞中，以减少细胞中Nampt mRNA水平，其中Nampt shRNA 2＃表现出最显著的干预效果（p <0.01，图4a），因此选择LV包装的Nampt shRNA 2＃（LV-sh-Nampt）进行后续分析。此外，发现感染LV-sh-Nampt导致细胞中Nampt蛋白水平下降（p <0.05，图4b）。此外，检查ECM相关蛋白的表达，发现IL-1β处理导致COL1A、ACAN和TIMP-1的表达水平下降，而MMP-2和MMP-9的表达水平上升，而Nampt沉默则出现相反的趋势（所有p <0.01，图4c-d）。此外，免疫荧光试验的结果表明，IL-1β处理下调了COL1A和ACAN的荧光强度，而Nampt沉默则产生相反的效果（所有p <0.01，图4e）。总之，这些发现表明Nampt沉默抑制了IL-1β诱导的成纤维细胞ECM降解。