iSeroSnFR: 一种用于检测血清素的新型遗传编码荧光生物传感器
该研究使用计算建模方法对iAChSnFR进行重新设计,创造了一种新的生物传感器iSeroSnFR,用于检测5-HT。该研究分三个步骤进行:
第一步,通过计算建模,预测了250,000个变体,并筛选出18个变体,其中变体7对10 mM 5-HT的荧光响应最大。
第二步,使用随机森林模型和SSM优化,预测出有助于传感器响应的重要位置,并筛选出约100个变体,其中突变组合通常优于单一突变。
第三步,应用广义线性模型,识别出有益的单个突变,设计小型目标文库,合成13个变体,并选出T66Y/F143M/H170A/H188T的变体,命名为iSeroSnFR0.1。经过两轮筛选,最终设计出iSeroSnFR,对5-HT的亲和力为310 ± 30 μM,最大值为800% (ΔF/F 0 )。
该研究表明,通过计算建模和定向进化的方法可以有效地提高生物传感器的性能,为研究血清素的生物学功能提供了一个新的工具。
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