请用地道、专业、书面化、具有强逻辑性的中文表达如下内容：23 Freeze-thaw treated dECM modulates macrophage polarization in vitroGiven the significant role of mechanical properties in determining macrophage responses RNA sequencing

2.3. 冻融处理的dECM在体外调节巨噬细胞极化

鉴于机械特性在决定巨噬细胞反应中的重要作用，我们使用RNA测序（RNA-seq）分析了冻融处理的dECM激活的巨噬细胞基因表达的变化[[62]，[63]，[64]]。样本在相关性分析中表现出良好的稳定性（R2 > 0.95）（图S9A，支持信息）。热图、维恩图和火山图显示了三组之间广泛的基因表达差异（图5A，以及图S9B、C、D、E，支持信息）。主成分分析显示，F/T 3组与对照组和F/T 7组明显不同，这可能是由于F/T 3组与对照组和F/T 7组之间显著的微观机械特性差异，表明球形尖端可能更能反映细胞的“感受”（图5B）[53]。 随后，为了探究巨噬细胞反应的差异，我们使用基因集富集分析（Gene Set Enrichment Analysis，GSEA）进行了基因本体（Gene Ontology，GO）富集分析和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG）功能通路分析。前16个下调的GO术语显示，与对照相比，免疫反应是主要的下调事件（图5C）。与对照相比，在F/T 3和F/T 7中，细胞因子-细胞因子受体相互作用和NF-κB信号通路被下调，已经证明与M1型极化相关（图5D，以及图S10A，支持信息）[65,66]。这些数据与先前的研究结果一致，其中NF-κB信号通路通过Piezo类型的机械敏感离子通道组分1（Piezo1）的活性增强，介导了依赖硬度的巨噬细胞炎症激活[19]。然而，有趣的是，与细胞黏附行为相关的术语，如调节肌动蛋白细胞骨架、黏附和紧密连接以及聚焦黏附，在F/T 3中上调，而细胞黏附分子（CAMs）在F/T 7中下调（图S10B、C、D、E，支持信息）。这些发现暗示了F/T 3和F/T 7中的dECM在细胞黏附中扮演着相反的角色。此外，我们分析了F/T 3组中的差异表达基因，发现应激反应相关基因直接影响免疫反应（图5E）。然后，我们重点关注了机械转导和巨噬细胞极化相关基因表达的差异（图5F）。所得热图显示，F/T 3中的dECM显著促进了细胞黏附，并使巨噬细胞向抗炎表型而不是促炎表型极化。此外，越来越多的证据证实，整合素和钙黏蛋白黏附复合物在感知多尺度的力学信号和将其转导为生物信号以调节多种细胞行为方面发挥重要作用。黏附复合物（如整合素和钙黏蛋白）和离子通道（包括TRPV4和PIEZO家族）作为机械感受器，在细胞内传递机械力，将其转化为调节细胞内过程的生化信号[64,[67]，[68]，[69]]。基于上述分析，我们推测本研究中巨噬细胞机械感应所涉及的NF-κB信号通路，以及冻融处理通过促进细胞黏附来修饰巨噬细胞极化。

2.4. 冻融处理的dECM表现出良好的生物相容性、可控的生物降解速率和调节巨噬细胞极化的能力

为了进一步研究其在体内的生物相容性、生物降解速率和免疫调节效应，我们将一个可调节机械性质的dECM植入到大鼠皮下模型中[62,70]