巴基斯坦腹泻犬中犬细小病毒CPV-2a变异体和猫泛白细胞减少症病毒序列的分子检测

巴基斯坦腹泻犬中犬细小病毒CPV-2a变异体和猫泛白细胞减少症病毒序列的分子检测

背景：犬细小病毒（CPV）感染是犬类的一种高度传染性疾病，死亡率高。本研究旨在对巴基斯坦费萨拉巴德地区感染的家养和流浪犬直肠拭子样本中分离的部分VP2基因（630 bp）进行详细的遗传分析。监测病毒至关重要，因为病毒感染的持续流行可能与新的致病毒株的出现有关。

方法：本研究于2014-15年期间，从巴基斯坦费萨拉巴德地区不同地区的腹泻犬中收集了40份直肠拭子样本，并通过免疫层析法筛查CPV。这些狗大多为表现出腹泻症状的流浪狗。提取病毒DNA，并使用基因特异性引物对Hfor/Hrev通过PCR扩增部分VP2基因。将扩增的片段克隆到pTZ57R/T（Fermentas）中，并进行完全测序。使用Lasergene DNA分析软件包（v8; DNAStar Inc., Madison, WI, USA）对序列进行分析和组装。

结果：免疫层析法结果显示，40只狗中有33只（82%）CPV阳性。我们成功地从25个样本中扩增出一个630 bp的片段。在25个样本中，检测到CPV-2a的序列，表明部分VP2蛋白中存在氨基酸替代Ser297Ala和氨基酸（426-Asn）。有趣的是，BLAST分析显示，在已检出新型CPV-2a的3个样本中，检测到猫泛白细胞减少症病毒（FPV）的序列，其与GenBank中其他FPV序列的序列同源性达到99%。

结论：系统发育分析显示，部分CPV-VP-2基因与来自中国、印度、日本和乌拉圭的病毒聚类，鉴定出一种新的变异体，而3个FPV序列与来自葡萄牙、南非和美国的病毒具有直接的祖先关系。有趣的是，CPV与商业疫苗株的聚类不同。本研究在分子水平上为了解巴基斯坦流行的CPV提供了更好的参考。检测到FPV可能是真正的共感染病例，也可能是由于摄入受污染食物造成的双重存在。