能帮我翻译吗The negative control shRNA and specific shRNAs targeting B7-H3 were designed and acquired from Guangzhou Novebio Guangzhou China and their sequences are provided in Table 1 The transfection proc
负对照shRNA和针对B7-H3的特异性shRNA的设计和采购来自广州Novebio(中国广州),其序列在表1中提供。转染程序遵循LipofectamineTM 3000脂质体说明书(Invitrogen Inc.,加州卡尔斯巴德,美国)。简要地说,2毫升单细胞悬液以5×105个细胞/孔的浓度种植在6孔板中,并在37°C的湿度为5%的CO2培养箱中培养。将2μg sh-B7-H3或sh-NC和5μL Lipofectamine™ 3000的混合物加入250μL新鲜无血清培养基中,将两种溶液混合生成shRNA / Lipofectamine™ 3000复合物,将其加入单细胞悬液中。经过4-6小时的孵育后,用完整培养基替换细胞,并在孵育48小时后在含300µg / ml AMP的培养基中种植28天,以产生CNE-2-shNC,CNE-2-shB7-H3,5-8F-shNC和5-8F-shB7-H3稳定细胞系。进行Western blotting以验证B7-H3基因失活以筛选稳定的细胞系。这些稳定的细胞系在所有实验中使用,除了共培养。
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