LUMA 测序：利用焦磷酸测序技术检测 DNA 甲基化

LUMA 测序方法将限制性酶切与焦磷酸测序技术相结合，能够特异性地检测 DNA 甲基化水平。该方法的第一步是将 dATP 与 5'-AATT 的 T 碱基结合，使 DNA 得到延长并释放产生 2 个焦磷酸。第二步是依次加入 dCTP 和 dGTP，产生两个焦磷酸的 5'-CG 末端片段。第三步是加入 dTTP，与 5'-AATT 的 A 碱基结合产生两个焦磷酸。第四步是加入 dCTP 和 dGTP，由于没有延伸，不会释放焦磷酸。释放的焦磷酸经过硫酸化酶的作用，产生 ATP 将荧光素转化为氧化荧光素，光信号由 CCD 捕获。未被剪切的甲基化的 C 产生 5'-CG 末端，在第二步不会产生 C + G 信号，而非甲基化的位点可以，因此可以将 DNA 甲基化水平与样本 C+G 的信号比值相关联。LUMA 测序方法的最大优点是特异性高，变异性低，因此在发现 DNA 甲基化改变中的微小差异方面具有很大优势。