基于F81细胞的病毒蚀斑纯化方法

1. 病毒稀释与接种:

将待纯化病毒稀释至10^-7，分别取10^-5、10^-6、10^-7三个稀释度的病毒液，接种于已长成良好单层的6孔F81细胞培养板中。每个稀释度接种2孔，每孔加入0.2 mL病毒液，置于37℃培养箱中吸附1小时。

2. 琼脂糖覆盖:

吸弃原有培养基，取2倍体积的细胞培养液与等体积的4%低熔点琼脂糖（60℃水浴加热融化）混合均匀。待琼脂糖溶液冷却至37℃后，加入细胞板中覆盖细胞，每孔2 mL。室温冷却至琼脂糖凝固，将细胞板置于37℃、5% CO2培养箱中培养2天。

3. 空斑挑取:

观察细胞板中的空斑形成情况，选择病毒稀释度最高且出现独立单个空斑的孔。在显微镜下，用移液枪挑取独立的单个空斑，转移至新鲜的DMEM培养基中重悬。

4. 传代纯化:

将重悬后的病毒液接种于已长成良好单层的6孔F81细胞培养板中，按照上述方法进行传代纯化，重复3代，最终获得纯化的病毒。

总结:

本方法利用病毒感染细胞后形成蚀斑的特性，通过梯度稀释、琼脂糖覆盖、空斑挑取和传代纯化等步骤，实现了病毒的有效纯化。该方法操作简便，重复性好，可用于多种病毒的纯化。