微型肠道类器官伽马射线和激光损伤模型

为了研究不同损伤对肠道上皮组织的影响，本研究分别使用伽马射线和激光对微型肠道类器官进行了损伤实验。

伽马射线辐射:

在辐照实验中，将微型肠道类器官暴露于使用 Gammacell 1000 Elite 137Cs 源 (MDS Nordion) 产生的 2-Gy 和 8-Gy 剂量的伽马辐射中，辐射剂量率为 0.143 Gy s-1。辐照后，根据标准方案培养样品，并监测其恢复情况长达 11 天。使用专门的 ImageJ 插件对相对 LGR5-eGFP 荧光进行定量分析，分别对隐窝区域进行归一化处理，然后减去归一化背景强度。实验至少独立重复两次，每个条件下设三个重复样本，结果相似。

激光损伤:

使用配备 10×/0.25 NA 物镜的纳秒激光系统（1 纳秒脉冲，100 赫兹频率，355 纳米；PALM MicroBeam (Zeiss) 激光显微切割系统），以恒定的平台速度和激光功率在上皮组织中生成矩形缺口。将一系列平行线的图案定位在腔内底部上皮组织上方 20 微米处。调整激光功率和蚀刻速度，以诱导细胞损伤而不破坏水凝胶。上皮组织损伤后，将样品连接回自动注射泵，并以每 3 小时 0.25 微升/分钟的速度灌流 20 分钟。至少在三个独立的实验中获得了类似的结果，每个实验均设三个重复样本。

结果:

本研究建立了两种有效的微型肠道类器官损伤模型，可用于研究肠道上皮组织的损伤修复机制。