评估ALPP和MBV

如先前报道[18],大鼠的尿道口用碘酒消毒,涂有石蜡油的硬膜外导管通过尿道插入膀胱2-3厘米。实验者将手指放在大鼠耻骨联合的上缘上,以防止导管穿过膀胱壁。在大鼠的膀胱排空后,将注射器连接到硬膜外导管上,使用微型泵(浙江大学医疗器械,浙江杭州,中国)以10毫升/小时的速度将亚甲蓝无菌生理盐水溶液注入膀胱。随后,当蓝色液体从尿道溢出时记录MBV。在另一次排空大鼠膀胱后,从导管中拔出注射器并将无菌生理盐水注射到MBV的一半。接下来,从大鼠上剪下一根胡须插入大鼠的鼻孔以刺激打喷嚏。从尿道口流出的蓝色液体被视为打喷嚏测试的阳性结果。每个SUI大鼠都被麻醉并放置在仰卧位,以进行中线切口。膀胱暴露后,在膀胱顶部制作直径为1.5毫米的顶点。将硬膜外导管(0.5-1厘米)植入膀胱。然后,导管被缝合并用5-0缝线固定。通过微型泵注入亚甲蓝生理盐水(37°C)到膀胱中。最终,使用压力传感器测量膀胱内的压力。

成纤维细胞培养

对照组的前阴道壁组织(0.5×0.5×1.0厘米)用PBS冲洗并切成小块[19]。随后,在25°C下以250g离心5分钟,然后用胶原酶分离120分钟和DNase I分离20分钟。随后,再次用PBS洗涤细胞,然后在Dulbecco的修正鹰氏培养基/高葡萄糖(HyClone; GE Healthcare Life Sciences,Logan,UT,USA)中培养,其中包括20%的牛血清(HyClone)。经过3-5天的初级培养后,成纤维细胞用胰蛋白酶分离2分钟并在培养瓶中进行传代


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