TSLP在真菌性角膜炎巨噬细胞极化中的作用

简介真菌性角膜炎是在眼外伤的基础上，由真菌侵入引起的角膜感染性疾病。病原体在不同的地区差异很大，但可分为两种最常见的物种：丝状真菌和酵母。其中，曲霉属和镰刀菌属是丝状真菌中的主要属，也是真菌性角膜炎的主要病原体[1]。感染后，菌丝渗入角膜表面，引起角膜穿孔或眼内感染，导致视力迅速丧失甚至失明[2，3]。在角膜抵抗真菌感染的过程中，细胞外 Toll 样受体 (TLRs) 和细胞内 NOD 样受体 (NLRs) 协同作用，识别真菌并激活核因子 κB (NF-kB) 基因的表达，从而诱导炎症细胞因子的产生[4]。细胞因子的释放可以启动免疫反应，并募集中性粒细胞和巨噬细胞等炎症细胞来放大炎症反应。然而，过度炎症会破坏正常的胶原基质，导致角膜透明度下降，视力恶化[5，6]。因此，探索真菌性角膜炎的发病机制，发现新的治疗靶点，寻找更有效的治疗方法，对改善该病的病情具有重要意义。

胸腺基质淋巴细胞生成素 (TSLP) 是一种 IL-7 样炎症因子，主要由肠上皮、气管上皮和表皮细胞等上皮细胞表达。然而，其他细胞类型，如肥大细胞、嗜碱性粒细胞和 DC，也被证明可以分泌[8]。TSLP 是一种具有多种免疫作用的调节因子，可促进 DC 的激活以及 T 和 B 淋巴细胞的分化，从而启动获得性免疫反应[14]。先前的研究表明，在体内烟曲霉感染小鼠模型的角膜中可以检测到高水平的 TSLP。此外，外源性注射 TSLP 会导致更严重的炎症和较差的预后[9]。在 A.F 与人角膜细胞 (HCCCs) 的体外共培养模型中，分泌的 TSLP 通过激活下游 STAT5 信号通路发挥其促炎作用，并且它还与 TLR2/MyD88/NF-κB 通路具有交联相互作用，导致大量炎症因子的释放，包括 IL-6 和 IL-8。此外，TSLP 特异性 siRNA 的转染可以限制炎症细胞和细胞因子的浸润[10，11][12][13]。一方面，TSLP 通过与 DC 上的 TSLP 受体 (TSLPR) 结合，可以诱导 DC 的成熟和迁移，然后被激活的 DC 分泌细胞因子来吸引幼稚的 CD4+T 细胞并诱导其分化为 Th2 细胞。另一方面，成熟的 DC 也可以产生 TSLP，并通过激活 JAK/STAT 信号通路来驱动 Th17 免疫反应[15，16]（17，18）。

巨噬细胞作为一种众所周知的免疫细胞，可以对趋化因子的释放做出反应，并积累到感染部位以消灭病原体。单核细胞-巨噬细胞具有较高的可塑性，可根据细胞微环境的变化分化为不同类型的巨噬细胞，发挥相应的功能。其中，巨噬细胞有两种主要分类：经典活化巨噬细胞 (M1)，通过产生 TNF-α (TNF-𝛂), IL-6、IL-1β (IL-1𝛃) 以及交替激活的巨噬细胞 (M2)，其通过高分泌 IL-4、IL-10 参与抗炎功能[20，21]。M1 巨噬细胞通过合成高水平的趋化因子来募集下游免疫细胞，并促进大量炎症基因表达，在获得性免疫反应中发挥关键作用[19]。不同的刺激可能会破坏 M1 和 M2 之间的平衡。先前的研究发现，在 A.F 感染的小鼠模型的角膜浸润巨噬细胞中，M1 巨噬细胞占主导地位。降低 M1/M2 巨噬细胞的比例可以有效减少炎症和缓解疾病进展（22，23）。

本研究旨在探讨烟曲霉刺激的 TSLP 是否可能成为真菌性角膜炎过程中的靶点，探讨外源 TSLP 对巨噬细胞极化的影响及其机制。

方法本研究采用体外细胞培养模型，使用人巨噬细胞株 THP-1 作为研究对象。首先，利用实时定量 PCR 和酶联免疫吸附实验 (ELISA) 检测 TSLP 在 THP-1 细胞中的表达水平。然后，将 THP-1 细胞分为两组，一组进行烟曲霉刺激，另一组作为对照组。使用实时定量 PCR 和 ELISA 检测巨噬细胞极化相关标志物的表达水平，包括 M1 巨噬细胞标志物 TNF-α 和 IL-6，以及 M2 巨噬细胞标志物 IL-10。最后，使用 Western blot 分析和免疫荧光染色检测 TSLP 对巨噬细胞极化相关信号通路的影响，包括 NF-κB 和 STAT5 信号通路。
预期结果我们预计烟曲霉刺激会显著增加 THP-1 细胞中 TSLP 的表达水平。同时，烟曲霉刺激可能导致 M1 巨噬细胞标志物 TNF-α 和 IL-6 的上调，以及 M2 巨噬细胞标志物 IL-10 的下调。我们还预计外源 TSLP 的添加可能会进一步增加 M1 巨噬细胞标志物的表达，并抑制 M2 巨噬细胞标志物的表达。最后，我们预计 TSLP 可能通过激活 NF-κB 和 STAT5 信号通路来影响巨噬细胞的极化。
意义本研究将有助于进一步了解真菌性角膜炎的发病机制，特别是在巨噬细胞极化方面的作用。同时，研究结果可能为真菌性角膜炎的治疗提供新的靶点和策略，如抑制 TSLP 的表达或干扰其信号通路。这将有助于改善真菌性角膜炎患者的预后和治疗效果。