真菌性角膜炎中TSLP促进巨噬细胞向M1极化：机制与治疗潜力

真菌性角膜炎的发病机制主要可分为两部分：真菌的侵袭生长和角膜炎症的放大[1]。在病原体感染过程中，在前房灌注不足和溃疡角膜的组织学中可以观察到大量炎症细胞，尤其是巨噬细胞和中性粒细胞[2，3]。疾病的早期阶段可以通过炎症反应和炎症因子如IL-1β和TNF-α的水平来监测和确定[4]。在这项研究中，我们发现，在THP-1衍生的巨噬细胞与烟曲霉菌丝上清液的共培养中，刺激了促炎细胞因子如TNF-α和IL-1的分泌，增强了。此外，TSLP在A。烟曲霉菌丝碎片处理THCs，提示TSLP与真菌性角膜炎有关。TSLP是一种上皮衍生的IL-7样细胞因子，是先天和适应性免疫反应的批评者，参与哮喘和特应性皮炎等炎症疾病的发病机制[4，5]。此外，TSLP在真菌性角膜炎中触发Th2细胞分化，从而增强烟曲霉诱导的炎症[6]。在铜绿假单胞菌感染的小鼠角膜中，TSLP的阻断导致树突细胞通过IL-23/IL-17信号通路耗竭[7]。TSLP由A。烟曲霉刺激的DC通过激活JAK-STAT信号通路参与T辅助细胞17的显性免疫反应[8]。朱等指出，烟曲霉感染真菌性角膜炎小鼠模型中存在大量TSLP产生以及IL-1β、IL-6和TNF-α浸润，TSLP抗体治疗组消除了这些影响。因此，TSLP有可能成为合理治疗真菌性角膜炎的新靶点。我们决心探索上皮表达的TSLP在抗烟曲霉角膜炎免疫防御中的作用及其潜在机制。

胡等人[10]证明，角膜中巨噬细胞的激活可能会引发过度的免疫反应，导致小鼠模型中真菌性角膜炎的急性发作。正常角膜中的巨噬细胞数量很少，一旦被病原体感染，激活的巨噬细胞就会迅速募集并调节免疫反应[11]。单核细胞-巨噬细胞谱系的可塑性可以通过转化为两种激活状态来观察：M1（经典）和M2（替代）表型对不同刺激的反应[12]。干扰素和toll样受体配体等特异性因子可引起M1巨噬细胞分化，代表性标记物高表达[13]。鉴于巨噬细胞在炎症性疾病中的重要性，TSLP对巨噬细胞极化的机制和作用还有待阐明。

在本研究中，100 ng/mL PMA和200 ng/ml LPS用于THP-1细胞以建立炎症模型。TSLP基因敲低导致TSLP分泌减少，IL-1的表达，和TNF-α在与烟曲霉处理的THCs共培养后略有降低。为了进一步研究TSLP对THP-1衍生的巨噬细胞的影响，用外源性rTSLP处理THP-1细胞12、24和48小时。我们发现IL-1，TNF-α和iNOS随时间升高，CD80和CD86在巨噬细胞上的表达动力学随时间变化。众所周知，CD86和CD80是一种特殊的表型标志物，iNOS、IL-1α是M1巨噬细胞的特异性功能标志物。在LPS刺激的基础上，不同时间的rTSLP处理增强了TNF-α和iNOS的表达，并改善了CD86、CD80，表明TSLP可以促进LPS刺激下巨噬细胞向M1表型的极化，与上述结果一致，THCEs分泌的TSLP可以改善THP-1衍生巨噬细胞的炎症基因表达。

有文献表明，巨噬细胞向M1型的极化需要激活MAPK和NFκB信号通路，LPS激活的MAPK/NFκB信息通路已被证明在小鼠巨噬细胞产生TNF-α和IL-6中发挥作用[14，15，16]。NF-kB二聚体分子通常与抑制性蛋白、NF-kB抑制剂（IkB）保持复合物。上游激活剂IκB激酶（IKKα/β）可以磷酸化IκBα亚基，并导致其从NF-κB二聚体中降解和解离，使NF-κB在细胞核和细胞质之间进行活性运输，并上调特异性基因表达[17，18]。根据转录组测序结果，NFκB通路与TSLP的治疗密切相关。我们的结果证实了rTSLP对NFκB信号通路激活的积极作用，即IκBα和NFκB p65的磷酸化随着rTSLP的存在而上调。此外，我们发现TSLP诱导的iNOS、IL-1和TNF-α的产生似乎是通过不同的NF-κB途径介导的。为了探讨NF-κB通路是否参与TSLP对巨噬细胞极化的影响，用rTSLP（50 ng/ml）和LPS处理THP-1细胞，加入或不加入咖啡酸苯乙酯（CAPE），这是一种可以特异性抑制NF-κB信号通路的天然化合物[19]。然而，通过用CAPE预处理THP-1细胞观察到抑制作用。CAPE能显著抑制磷酸化NFκB/NFκB含量的变化，但对IKBα的磷酸化作用不大。TSLP诱导的这些细胞因子的产生通常主要受到CAPE的抑制，特别是对TNF-α的抑制，这表明TSLP的炎症作用可能通过阻断NF-κB途径而受到抑制。此外，TSLP诱导的CD80和CD86表达增强可通过CAPE预处理轻微逆转。

在上述研究中，作者发现TSLP可以促进巨噬细胞向M1表型的极化，并增强炎症基因表达。巨噬细胞的极化过程通常涉及MAPK和NFκB信号通路的激活。研究中发现，TSLP的存在可上调NFκB通路的活性，包括IκBα和NFκB p65的磷酸化。此外，用特异性抑制NFκB信号通路的化合物CAPE处理THP-1细胞可以抑制TSLP诱导的巨噬细胞极化和炎症因子产生。

然而，在这一部分中并没有详细说明巨噬细胞是如何向M1型表型的极化以及与相关基因表达的调控。因此，在未来的研究中，需要进一步探索TSLP在巨噬细胞极化和炎症调控中的具体作用机制，包括信号通路的调控、转录因子的参与以及相关基因的表达调控。这将有助于更好地理解TSLP在真菌性角膜炎免疫防御中的作用机制，并为治疗该疾病提供新的靶点。