双分子荧光互补实验如何做，并给出参考文献？

双分子荧光互补实验是一种用于研究蛋白质相互作用的技术。它基于两个融合的荧光蛋白（FP）分别标记了两个不同的蛋白质，当这两个蛋白质相互作用时，荧光蛋白会发生互补，从而产生荧光信号。以下是双分子荧光互补实验的步骤：

1. 制备两个融合荧光蛋白：分别将两个荧光蛋白基因克隆到表达载体中，并将它们融合在一起。在融合的区域中，插入一个连接肽，使得两个荧光蛋白可以相互作用。

2. 转染细胞：将表达两个融合荧光蛋白的载体转染到细胞中，使其表达出来。

3. 显微镜观察：使用荧光显微镜观察细胞中的荧光信号，如果两个融合荧光蛋白相互作用，则会产生互补的荧光信号。

4. 分析荧光信号：通过分析荧光信号的强度和位置，可以确定两个融合荧光蛋白的相互作用程度。

参考文献：

1. Hu CD, Kerppola TK. Simultaneous visualization of multiple protein interactions in living cells using multicolor fluorescence complementation analysis. Nat Biotechnol. 2003 Jun;21(6):539-45.

2. Paulmurugan R, Gambhir SS. Combinatorial library screening for developing an improved split-firefly luciferase fragment-assisted complementation system for studying protein-protein interactions. Anal Chem. 2007 Aug 1;79(15):5785-92.