SUI大鼠模型的建立与评估

SUI大鼠模型的建立与评估

一、动物与模型建立

本研究选用8周龄、体重280-330 g的雌性Sprague-Dawley大鼠（北京维特动物实验技术有限公司，北京，中国，SYXK (北京), 2017-0033），在12小时光/暗循环下，恒温（20℃-26℃）和湿度（40%-60%）的条件下饲养，自由饮水和饲料。

SUI大鼠模型的建立参照先前研究[18]的方法进行。具体操作步骤如下：

1. 适应环境的大鼠经腹腔注射氯胺酮（50 mg/kg）麻醉后，固定前肢并使其仰卧在笼子里。2. 将导尿管插入大鼠阴道2-3 cm，并用单根3-0手术针固定。3. 用5 mL无菌生理盐水充盈导尿管上的气囊。4. 将导管悬挂在笼子上方，确保气囊不接触任何表面。5. 在导管末端连接一个重约0.3 kg的水囊，平行于阴道方向对大鼠施加持续牵引力，持续8小时。

二、模型评估

在损伤1周后，测量大鼠的最大膀胱容量（MBV）和腹部漏点压力（ALPP），以评估SUI模型是否成功建立。

2.1 ALPP和MBV的测定方法：

1. 用碘伏消毒大鼠的尿道口。2. 将涂有石蜡油的硬膜外导管经尿道插入膀胱，深度约2-3 cm。实验过程中，需用手指轻压大鼠耻骨联合上缘，防止导管穿透膀胱壁。3. 排空大鼠膀胱内的尿液。4. 将注射器连接到硬膜外导管上，使用微型泵（浙江大学医学仪器，浙江杭州，中国）以10 mL/h的速度向膀胱内注入亚甲蓝无菌生理盐水溶液。记录蓝色液体从尿道口溢出时的容量，即为MBV。5. 再次排空大鼠膀胱内的液体。6. 断开注射器，将无菌生理盐水注入膀胱，注入量为MBV的一半。7. 剪取大鼠一根胡须，并将其插入大鼠鼻孔刺激打喷嚏。观察是否有蓝色液体从尿道口流出，如有则视为打喷嚏试验阳性。8. 对每只SUI大鼠进行麻醉，并使其仰卧。沿腹中线切开皮肤和肌肉，暴露膀胱。9. 在膀胱顶部剪出一个直径约1.5 mm的小孔。10. 将一段0.5-1 cm长的硬膜外导管插入膀胱，并用5-0缝线缝合固定。11. 通过微型泵向膀胱内注入37℃的亚甲蓝生理盐水，并使用压力传感器实时监测膀胱内的压力变化。

2.2 模型评估指标：

• 最大膀胱容量 (MBV): 指膀胱充盈至尿液从尿道口溢出时的容量，反映膀胱的储尿功能。* 腹部漏点压力 (ALPP): 指膀胱内压力升高至尿液从尿道口漏出时的压力值，反映尿道括约肌的功能和控尿能力。

三、成纤维细胞培养

1. 取对照组大鼠的前阴道壁组织（0.5×0.5×1.0 cm），用PBS冲洗干净后切成小块[19]。2. 将组织块在25℃下以250 g离心5分钟。3. 加入胶原酶，在37℃下消化120分钟，使组织充分解离。4. 加入DNase I，在37℃下继续消化20分钟，以去除DNA残留。5. 再次用PBS冲洗细胞，去除残留的酶液。6. 将细胞重悬于含20%胎牛血清（HyClone）的Dulbecco's Modified Eagle's Medium/高糖培养基（HyClone；GE Healthcare Life Sciences，Logan，UT，USA）中，置于细胞培养箱中进行培养。7. 待细胞生长至80%-90%融合时，使用胰酶消化2分钟，将细胞从培养瓶底部脱落下来，进行传代培养。

四、数据分析

所有数据均采用SPSS软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差（x̄±s）表示，组间比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。