外源蛋白包涵体复性操作流程：常见方法及优化建议

目前较多采用的表达系统为大肠杆菌表达系统。然而当外源蛋白质在大肠杆菌中高效表达时常形成不可溶，无活性的聚集体，又称包涵体，包涵体须通过体外复性操作使其形成正确的高级结构才能得到具有预期生物活性的目的蛋白。目前针对外源蛋白质包涵体的最流行的复性操作流程一般包括以下几个步骤：

1. 包涵体的提取：将大肠杆菌中表达的外源蛋白质包涵体分离出来。这一步可以通过细胞破碎、超声波处理等方法来实现。

2. 包涵体的溶解：将包涵体溶解在适当的缓冲液中，通常使用含有变性剂（如尿素或胍盐）的缓冲液，以使包涵体中的蛋白质完全展开。

3. 缓冲液的调整：逐渐去除变性剂，同时调整缓冲液的pH和离子强度，以促进蛋白质正确的折叠和形成高级结构。

4. 辅助折叠剂的添加：在缓冲液中添加一些辅助折叠剂，如氧化还原剂（如谷胱甘肽）、辅酶（如NADH）等，以帮助蛋白质正确地折叠。

5. 温度和时间的优化：对复性过程中的温度和时间进行优化，以获得最佳的复性效果。

6. 包涵体的纯化：通过离心、过滤或亲和层析等技术，将复性后的目的蛋白质从其他未复性或复性不完全的蛋白质中纯化出来。

7. 结构和活性的检测：对纯化后的蛋白质进行结构和活性的检测，以确认复性的成功和蛋白质的功能。

需要注意的是，复性操作的具体步骤和条件可能因不同的蛋白质而有所差异，因此在具体实验中需要根据目的蛋白质的特性进行调整和优化。