免疫组织化学(IHC)是什么？| 原理、步骤、应用

免疫组织化学(IHC)是什么？

免疫组织化学(IHC)是一种常用的实验室技术，用于在组织切片中定位特定的抗原。它利用抗体与其靶抗原的特异性结合来检测组织样本中特定蛋白质的表达和定位。IHC广泛应用于诊断病理学、生物医学研究和药物开发等各个领域。

IHC的原理

IHC基于抗原抗体相互作用的原理。抗体是免疫系统产生的蛋白质，可以识别并结合特定的靶分子，称为抗原。在IHC中，将针对目标抗原的特定抗体应用于组织切片。抗体与组织中存在的任何目标抗原结合。然后，通过使用标记的二抗或显色系统来检测这种抗体-抗原结合，从而实现目标抗原的可视化。

IHC的步骤

IHC实验的基本步骤如下：

1. 组织准备： 收集组织样本并将其固定和包埋在石蜡中，以便进行切片。
2. 切片和贴附： 将组织样本切成薄片并贴附到载玻片上。
3. 脱蜡和水化： 用二甲苯和乙醇系列溶液对切片进行脱蜡和水化。
4. 抗原修复： 使用热诱导抗原修复或酶消化等方法来揭示抗原表位。
5. 封闭： 使用封闭试剂封闭非特异性结合位点。
6. 孵育一抗： 将切片与针对目标抗原的一抗孵育。
7. 洗涤： 洗涤切片以去除未结合的抗体。
8. 孵育二抗： 将切片与标记的二抗孵育，该二抗与一抗结合。
9. 洗涤： 洗涤切片以去除未结合的二抗。
10. 显色： 使用显色系统，如过氧化物酶-二氨基联苯胺(DAB)或碱性磷酸酶-新 fuchsin，对结合的抗体进行可视化。
11. 复染： 使用苏木精等复染剂对细胞核进行复染。
12. 脱水、透明和封片： 对切片进行脱水、透明和封片，以便长期保存。

IHC的应用

IHC具有广泛的应用，包括：

• 诊断病理学： 诊断和分类癌症、识别感染性病原体以及检测其他疾病标志物。
• 生物医学研究： 研究蛋白质表达、定位和功能，以及研究疾病机制。
• 药物开发： 评估药物疗效和毒性，以及识别新的药物靶点。

IHC结果解读

IHC染色的结果通常通过光学显微镜观察。目标抗原的存在通过切片中出现棕色(DAB)或红色(新 fuchsin)沉淀来指示。染色强度和模式可以提供有关抗原表达水平和细胞定位的信息。

IHC的优缺点

优点：

• 高特异性： IHC能够检测组织中特定的抗原。
• 高灵敏度： IHC能够检测低丰度的抗原。
• 原位分析： IHC可以提供抗原在组织内的空间信息。
• 相对低成本： 与其他技术相比，IHC相对便宜。

缺点：

• 需要专门的设备和试剂。
• 结果的解释可能具有主观性。
• 需要经过培训的人员进行操作和结果解读。
• 可能存在非特异性染色。

结论

IHC是一种强大的工具，可以用于研究组织中蛋白质的表达和定位。它在诊断病理学、生物医学研究和药物开发等各个领域都有广泛的应用。了解IHC的原理、步骤、应用和局限性对于正确解释结果至关重要。