环状脂肽的生物合成基因簇通常很大(> 30 kb),GC含量低。此外,基因簇包含重复序列(Tsuge等人,2007),在克隆和转化过程中导致重组,断裂和丢失。已经开发了几种直接克隆大型基因簇的方法,以克服这些问题,包括Red / ET系统介导的线性加线性同源重组(Wang等人,2016),Cas9辅助染色体片段定位(CATCH)(Jiang等人,2015),金门组装或Gibson组装(Celinska等人,2017; Silayeva&Barnes,2018),ϕBT1整合酶介导的直接克隆(Kvitko等人,2013)和TAR(Larionov等人,1997)。其中,TAR技术不仅可以从链霉菌中克隆具有高GC含量的生物合成基因簇,还可以从复杂基因组中选择性地分离低GC含量的基因簇。此外,捕获长度高达300 kb,已经成功使用这种策略克隆和表达了一些基因簇,例如cosmomycin(Larson等人,2017),salinamide(Ray等人,2016),去甲基纤维素(Wu等人,2017),thiotetramide(Tang等人,2015),surfactin(Li等人,2015)和plipastatin(Hu等人,2018)。目前,还没有关于使用TAR克隆iturin基因簇的报告


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