帮我翻译 Western blot analysisTotal protein content was extracted from the anterior vaginal wall tissues and fibroblasts using radio-immunoprecipitation assay buffer solution containing phenylmethylsulfo

Western blot分析 使用放射免疫沉淀法缓冲液溶液（含苯甲磺酰氟[23]）从前阴道壁组织和成纤维细胞中提取总蛋白质含量。使用双胍酸盐酸（Beyotime Biotechnology Co.，Ltd，上海，中国）套件检测总蛋白浓度后，蛋白变性在95℃下进行。随后，使用10％十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳从样品中分离蛋白质，然后转移到聚偏氟乙烯膜上。然后，将膜阻塞并与以下主要抗体（均采自Abcam）孵育：Nampt（ab236874，稀释比为1：1000），金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1，ab211926，稀释比为1：1000），COL1A（ab96723，稀释比为1：500），ACAN（ab3778，稀释比为1μg / mL），基质金属蛋白酶2（MMP-2，ab92536，稀释比为1：1000），MMP-9（ab76003，稀释比为1：1000），LC3（ab192890，稀释比为1：2000），Beclin-1（ab210498，稀释比为1：1000）和β-actin（ab8227，稀释比为1：1000）在4℃孵育过夜。随后，用三氯甲烷洗涤缓冲液进行三次洗涤，然后用二级抗体（ab6721或ab6789，稀释比为1：2000，Abcam）孵育2小时。使用增强化学发光检测试剂盒（EMD Millipore，Billerica，MA，USA）检测化学发光膜的免疫反应。灰度值反映相对表达，使用Image J软件（NIH）分析蛋白质的相对表达，其中β-actin作为内部参考。 统计分析 采用SPSS 21.0软件（IBM Corp. Armonk，NY，USA）进行数据分析，采用GraphPad Prism 8.0软件（GraphPad Software Inc.，San Diego，CA，USA）进行绘图。检查所有测量数据的正态分布和方差齐性检验。使用t检验进行两两比较，而使用单因素或双因素方差分析（ANOVA）进行多组比较分析，而采用Tukey的多重比较检验或Sidak的多重比较检验用于后测试数据。使用双尾检验获得p值，p值小于0.05被视为具有统计学意义。 结果 本研究旨在调查Nampt在SUI成纤维细胞中的ECM代谢中的作用。首先，分析了Nampt在SUI患者和大鼠中的表达模式。此外，我们还研究了Nampt在体外调节成纤维细胞ECM代谢的机制。研究结果表明，Nampt在SUI中过度表达，而Nampt沉默可以抑制SUI成纤维细胞ECM降解。此外，我们还验证了Nampt沉默可以通过增强自噬来抑制SUI成纤维细胞ECM降解。 Nampt在SUI患者中过度表达 衰老，阴道分娩和激素水平下降（绝经期）被认为是SUI的主要风险因素[25-27]。同时，Nampt参与各种生理过程，如细胞分化，衰老和细胞凋亡[28,29]。因此，为了阐明Nampt在SUI中的作用，我们收集了SUI患者和非SUI患者的前阴道壁组织，以检查组织中Nampt的表达模式。 RT-qPCR和Western blot分析的结果表明，与非SUI患者相比，SUI患者的组织中Nampt高表达（p <0.01，图1A-B）。此外，免疫荧光结果表明，与非SUI患者相比，SUI患者的Nampt荧光信号过度表达（p <0.01，图1C）。总体而言，这些发现表明Nampt在SUI患者中高度表达