帮我翻译 Nampt silencing elicits IL-1β-treated fibroblast autophagyPrevious studies have also suggested that Nampt can influence autophagy 13 14 while changes in autophagy levels are known to affect ECM

Nampt的沉默引发了IL-1β处理的成纤维细胞自噬 以前的研究也表明Nampt可以影响自噬[13,14]，而自噬水平的变化已知会影响ECM代谢[16,35]。因此，我们推测Nampt通过调节自噬影响ECM代谢，并随后检查了Nampt对自噬的影响。发现IL-1β处理导致自噬水平下降，表现为自噬体数量减少、LC3Ⅱ/Ⅰ比率下降和Beclin-1的表达下调（p <0.01，图5A-B），而LC3和Beclin-1被确定为促进自噬的指标[27,28]。此外，免疫荧光分析证实，IL-1β处理导致细胞中LC3荧光强度降低（p <0.01，图5C）。另一方面，Nampt沉默后观察到自噬水平增强（p <0.01，图5A-C）。总之，这些发现表明Nampt沉默引起了IL-1β处理的SUI成纤维细胞自噬。 Nampt沉默通过诱导自噬抑制IL-1β诱导的成纤维细胞ECM降解 最后，为验证自噬在Nampt机制中调节SUI成纤维细胞ECM降解的作用，我们使用3-MA在LV-sh-Nampt组中抑制成纤维细胞自噬。 RT-qPCR和Western印迹分析结果显示，在抑制自噬后，细胞中COL1A、ACAN和TIMP-1的表达水平均下降，而MMP-2和MMP-9的表达水平则增加（p <0.05，图6A-B）。免疫荧光分析结果进一步说明，在自噬下调时，COL1A和ACAN的荧光强度均减弱（p <0.01，图6C）。总之，这些发现证实，抑制自噬可以逆转Nampt沉默对IL-1β诱导的SUI成纤维细胞ECM降解的抑制作用。 讨论 应力性尿失禁（SUI）被认为是由尿道关闭功能失调引起的难治性疾病，给全球人口和医疗机构带来巨大负担[36]。ECM生成的改变是SUI发病和患病率的重要候选因素[37]。同时，我们同行的努力表明，由于Nampt调节炎症反应、免疫行为、细胞代谢和基因活性而能够参与多种疾病的发生[38]。有趣的是，先前曾指出Nampt过表达会增强ECM降解，从而促进病理损伤[39]。在本研究中，我们阐明了Nampt沉默如何增强SUI成纤维细胞自噬并抑制ECM降解。我们的研究是第一个揭示Nampt通过增强自噬抑制SUI成纤维细胞ECM降解的研究。此外，我们采用了一种新颖的方法，探索了SUI成纤维细胞中的调节因子及其下游机制，旨在改善对SUI的诊断和治疗方法。 衰老过程是SUI的成因之一[40]。同时，Nampt也因其对细胞代谢行为、细胞死亡和重编程的调节作用而被认为参与衰老相关疾病[41]。在本研究中，我们注意到Nampt在SUI患者和VD诱导的SUI大鼠模型中高表达。我们进一步从非SUI患者中分离成纤维细胞，并用IL-1β处理它们以探索Nampt在SUI中的特定作用，发现Nampt在IL-1β处理的成纤维细胞中过表达。另外，先前曾指出，激活的Nampt表达可阻止关节软骨细胞分化并增加骨关节炎的发展[42]。同样，另一项研究表明，IL-1β处理诱导的Nampt在牙周炎成纤维细胞中过表达，并进一步促进炎症反应和牙槽骨破坏[32]。总之，这些证据暗示了Nampt对SUI成纤维细胞的负面影响。 最近的研究表明，ECM的降解和产生可以通过破坏细胞结构和能量代谢行为而加重SUI[19]。此外，Nampt被认为调节细胞生物行为并增强ECM重塑，从而增加心血管系统内皮损伤[43]。因此，为进一步阐明Nampt在SUI成纤维细胞ECM降解中的作用，我们将LV-sh-Nampt注射到IL-1β处理的成纤维细胞中以下调Nampt表达，并发现Nampt沉默导致COL1A、ACAN和TIMP-1的表达增加，MMP-2和MMP-9的表达降低。与此一致，另一项先前的研究表明，Nampt耗竭与TIMP-1激活有关，并可进一步用于预测糖尿病性肾病患者成纤维细胞的ECM生产[11]。与我们的发现相一致，Peiro C等人的研究表明，Nampt可以增加MMP-2和MMP-9的表达，同时抑制TIMP-1水平，破坏孕期高血压患者的ECM代谢和防御[44]。总之，这些发现和证据表明，Nampt沉默可以抑制IL-1β诱导的SUI成纤维细胞ECM降解。 另一方面，Nampt耗竭也与自噬增强有关，从而减少脓毒症诱导的急性肺损伤[45]。自噬的自我降解机制通过催化老化细胞的损失和消除多余或受损基因而参与各种病理过程[46]。此外，自噬先前与有限的ECM生产和促进椎间盘退行性变的抗衰老功能有关[47]。因此，我们探索Nampt在SUI成纤维细胞中调节自噬的机制，并发现Nampt沉默导致自噬水平提高，表现为LC3Ⅱ/Ⅰ比率和Beclin-1表达水平升高。同样，先前的研究表明，抑制Nampt蛋白水平会导致LC3水平升高，这是自噬的一个著名指标[48]。此外，Nampt敲除先前已被显示可以通过提高Beclin-1水平来增强自噬，这与我们的发现非常一致[49]。总之，上述证据表明，Nampt沉默对IL-1β处理的SUI成纤维细胞自噬产生了负面影响。此外，为验证自噬在Nampt在SUI成纤维细胞中调节ECM降解的机制中的作用，我们使用3-MA抑制了LV-sh-Nampt组中成纤维细胞的