帮我翻译 Nampt is overexpressed in SUI rat modelsSUI rat models were established using the vaginal dilatation method VD and establishment of the same was confirmed through ALPP and MBV detection 18 It wa
Nampt在SUI大鼠模型中过度表达 使用阴道扩张法(VD)建立了SUI大鼠模型,并通过ALPP和MBV检测确认了建立的相同性[18]。发现VD治疗使大鼠的ALPP和MBV明显降低(p < 0.01,图2A-B),这表明成功建立了SUI大鼠模型。通过RT-qPCR和Western blot分析进一步检查了获得的大鼠阴道前壁组织中Nampt的表达模式,结果表明VD治疗导致组织中Nampt的上调(p < 0.01,图2C-D),免疫荧光结果表明VD治疗导致小鼠组织中Nampt荧光信号的增强(p < 0.01,图2E)。综上所述,这些发现表明Nampt在SUI大鼠模型中高表达。
Nampt表达在IL-1β处理的阴道前壁成纤维细胞中上调 成纤维细胞功能障碍已被确定为SUI发病和发展的主要因素[21, 30]。因此,我们从非SUI患者中分离和孵育成纤维细胞。免疫细胞化学分析表明,这些细胞对于成纤维细胞指示器vimentin呈阳性,对于肌上皮细胞指示器keratin呈阴性(图3A)。此外,现有的文献表明Nampt参与了IL-1β诱导的基质降解过程[31, 32]。因此,我们用不同浓度的IL-1β处理成纤维细胞,发现IL-1β浓度越高,细胞活性降低越大(p < 0.05,图3B)。此外,IL-1β处理使细胞中Nampt水平呈浓度依赖性上调(p < 0.05,图3C-D)。综上所述,这些发现表明IL-1β处理上调了成纤维细胞中的Nampt表达,并与浓度相关。此外,选择了10 ng/mL的IL-1β剂量进行后续实验。
Nampt沉默抑制IL-1β诱导的SUI成纤维细胞ECM降解 越来越多的研究已经证实,机械损伤诱导的ECM重塑可能与SUI的发病机制有关[4, 33],而ECM代谢被认为是由成纤维细胞介导的[34]。为了进一步阐明Nampt在ECM降解中的作用,将3个LV包装的Nampt shRNA感染到10 ng/mL IL-1β处理的成纤维细胞中,以降低细胞中Nampt mRNA水平,其中Nampt shRNA 2#表现出最显著的干扰效率(p < 0.01,图4A),因此选择LV包装的Nampt shRNA 2#(LV-sh-Nampt)进行后续分析。此外,发现感染LV-sh-Nampt导致细胞中Nampt蛋白水平下降(p < 0.05,图4B)。此外,检查ECM相关蛋白的表达表明,COL1A、ACAN和TIMP-1的表达水平都降低了,而MMP-2和MMP-9的表达水平在IL-1β处理时增加,而在Nampt沉默时观察到相反的趋势(所有p < 0.01,图4C-D)。此外,免疫荧光实验的结果表明,IL-1β处理降低了COL1A和ACAN的荧光强度,而Nampt沉默则产生了相反的效果(所有p < 0.01,图4E)。总之,这些发现表明Nampt沉默抑制了IL-1β诱导的成纤维细胞ECM降解
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