Nampt在SUI大鼠模型中过度表达 使用阴道扩张法(VD)建立了SUI大鼠模型,并通过ALPP和MBV检测确认了建立的相同性[18]。发现VD治疗使大鼠的ALPP和MBV明显降低(p < 0.01,图2A-B),这表明成功建立了SUI大鼠模型。通过RT-qPCR和Western blot分析进一步检查了获得的大鼠阴道前壁组织中Nampt的表达模式,结果表明VD治疗导致组织中Nampt的上调(p < 0.01,图2C-D),免疫荧光结果表明VD治疗导致小鼠组织中Nampt荧光信号的增强(p < 0.01,图2E)。综上所述,这些发现表明Nampt在SUI大鼠模型中高表达。

Nampt表达在IL-1β处理的阴道前壁成纤维细胞中上调 成纤维细胞功能障碍已被确定为SUI发病和发展的主要因素[21, 30]。因此,我们从非SUI患者中分离和孵育成纤维细胞。免疫细胞化学分析表明,这些细胞对于成纤维细胞指示器vimentin呈阳性,对于肌上皮细胞指示器keratin呈阴性(图3A)。此外,现有的文献表明Nampt参与了IL-1β诱导的基质降解过程[31, 32]。因此,我们用不同浓度的IL-1β处理成纤维细胞,发现IL-1β浓度越高,细胞活性降低越大(p < 0.05,图3B)。此外,IL-1β处理使细胞中Nampt水平呈浓度依赖性上调(p < 0.05,图3C-D)。综上所述,这些发现表明IL-1β处理上调了成纤维细胞中的Nampt表达,并与浓度相关。此外,选择了10 ng/mL的IL-1β剂量进行后续实验。

Nampt沉默抑制IL-1β诱导的SUI成纤维细胞ECM降解 越来越多的研究已经证实,机械损伤诱导的ECM重塑可能与SUI的发病机制有关[4, 33],而ECM代谢被认为是由成纤维细胞介导的[34]。为了进一步阐明Nampt在ECM降解中的作用,将3个LV包装的Nampt shRNA感染到10 ng/mL IL-1β处理的成纤维细胞中,以降低细胞中Nampt mRNA水平,其中Nampt shRNA 2#表现出最显著的干扰效率(p < 0.01,图4A),因此选择LV包装的Nampt shRNA 2#(LV-sh-Nampt)进行后续分析。此外,发现感染LV-sh-Nampt导致细胞中Nampt蛋白水平下降(p < 0.05,图4B)。此外,检查ECM相关蛋白的表达表明,COL1A、ACAN和TIMP-1的表达水平都降低了,而MMP-2和MMP-9的表达水平在IL-1β处理时增加,而在Nampt沉默时观察到相反的趋势(所有p < 0.01,图4C-D)。此外,免疫荧光实验的结果表明,IL-1β处理降低了COL1A和ACAN的荧光强度,而Nampt沉默则产生了相反的效果(所有p < 0.01,图4E)。总之,这些发现表明Nampt沉默抑制了IL-1β诱导的成纤维细胞ECM降解


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