细胞培养传代操作步骤详解

提前准备好培养基、胰酶、磷酸盐缓冲液(PBS)、新的培养皿、5ml离心管、无菌枪头，并在前一天使用紫外线对工作台进行消毒。

使用显微镜观察细胞密度，当细胞快要铺满整个视野时进行传代。

从培养箱中取出需要传代的细胞，倒掉废液，加入2ml的PBS清洗细胞后将PBS吸出。

将0.5ml的胰酶均匀地加入培养皿中，轻轻晃动培养皿使胰酶覆盖整个培养皿的细胞，然后将培养皿放入恒温培养箱中静置1分钟进行消化。

取出培养皿，加入2ml的培养液终止消化，倾斜培养皿并用移液枪轻轻吹打细胞使贴壁细胞脱落。

使用移液枪将细胞悬液转移至5ml离心管中，在离心机中以800rpm离心5分钟。

在培养皿中加入4ml新鲜的培养液。

使用吸引器将上清液弃去，加入1ml新鲜培养液后用移液枪轻轻吹散细胞，将细胞悬液加入培养皿中，然后进行8字摇匀。