RNA提取步骤简化指南:从细胞到浓度检测
以下是简化的RNA提取步骤:
- 预冷离心机。
- 取出细胞,去除废液,用PBS洗涤细胞3次。
- 每个孔中加入300ul Trizol试剂,静置5分钟后转移到高压过滤的EP管中,静置5分钟。
- 加入300ul氯仿,剧烈震荡10-15秒,静置10分钟。离心机12000rpm离心15分钟。
- 取出离心管,吸取上层液体400ul置于新的EP管中。
- 加入同等体积的异丙醇,混匀后静置10分钟。
- 预热金属浴至55℃。
- 离心机12000rpm离心15分钟。
- 取出含有白色沉淀的EP管,去除上层废液,加入50ul ETOH混匀,离心机离心。
- 取出离心管,去除上层废液,加入50ul ETOH混匀,离心机离心。
- 去除上层废液,室温晾干5分钟。
- 加入30ul DEPC水,根据沉淀量调整。
- 金属浴10分钟。
- 使用微量分光光度计检测RNA浓度并记录。
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